超濾親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是通過受體與有潛在 活性的小分子配體結(jié)合形成配體-受體配合物,與未 結(jié)合的化合物通過超濾膜分離出來,然后配合物中 釋放出結(jié)合的配體化合物,最后通過超高效液相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)進行分析鑒定。超濾親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是一種從天 然產(chǎn)物中篩選生物活性化合物的高效方法 。DHP 恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科學儀器有限公司); YXQ 高壓蒸汽滅菌鍋(上海博訊實業(yè)有限公司); DL-CJ-2N 超級工作臺(北京東聯(lián)哈爾有限公司); Milli-Q Reference超純水儀(美國Millipore公司)。
精密稱取黃芪甲苷、毛 蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊異黃酮、芒柄花黃素、白術(shù) 內(nèi)酯Ⅰ對照品適量,分別置于 10 mL 量瓶中,用甲醇 溶解并定容至刻度,配制成質(zhì)量濃度分別為 1.02、 0.97、0.99、1.05、1.09 mg·mL?1 的對照品溶液,4 ℃避 光保存。使用前,50% 甲醇溶液稀釋到所需的質(zhì)量 濃度。超濾親和篩選只能確 定化合物與靶標蛋白有結(jié)合性,但是生物活性還需 進一步實驗驗證。后期本課題組會深入研究白術(shù) 內(nèi)酯Ⅰ在細胞水平及動物體內(nèi)對 Tim-3 表達的影響 及作用機制。